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高壓勻漿機廠家分析組織勻漿的制備

發布時間:2017-09-04   點擊次數:667次
  高壓勻漿機廠家講解組織勻漿的制備:
  1、取組織塊(0.2g~1g)zui少可到2~5mg,在冰冷的生理鹽水中漂洗,除去血液,濾紙拭干,稱重,放入5或10ml的小燒杯內。
  2、用移液管量取預冷的勻漿介質或者用0.86%冷生理鹽水,勻漿介質或生理鹽水的體積總量應該是組織塊重量的9倍,用移液管或移液器取總量的2/3的勻漿介質或生理鹽水于燒杯中,用眼科小剪盡快剪碎組織塊。
  3、勻漿的方式有多種:手工勻漿、機器勻漿、超聲勻漿、反復凍融。
  手工勻漿:將剪碎的組織倒入玻璃勻漿管中,再將剩余的1/3勻漿介質或生理鹽水沖洗殘留在燒杯中的碎組織塊,一起倒入勻漿管中進行勻漿,左手持勻漿管將下端插入盛有冰水混合物的器皿中,右手將搗桿垂直插入套管中,上下轉動研磨數十次(6~8分鐘),充分研碎,使組織勻漿化;
  機器勻漿:用高壓勻漿機上下研磨制成10%組織勻漿,也可用內切式勻漿機制備(勻漿時間10秒/次,間隙30秒,連續3~5次,在冰水中進行),皮膚、肌肉組織等可延長勻漿時間;
  超聲粉碎:用超聲粉碎機進行粉碎,用超聲波發生器使細胞破碎,也可用超聲波發生儀,5秒/次,間隙10秒反復3~5次;
  反復凍融:培養或者分離的細胞可以用以上的方法勻漿,也可以反復凍溶3次左右,但有部分酶活力會受影響。取少量組織勻漿做涂片(直接涂片、染色均可),顯微鏡下觀察細胞是否磨破,若沒有破則可以延長勻漿時間或增加凍融次數。
  4、將制備好的10%勻漿用普通離心機或低溫低速離心機離心10~15分鐘,若檢測ATP酶,則只需要1000轉/分,離心5分鐘,將離心好的勻漿留下上清棄下面沉淀。根據實驗需要,取適量上清夜進行各種測定。
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