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高壓細胞破碎儀廠家談組織細胞的破碎

發布時間:2017-09-29   點擊次數:979次
  高壓細胞破碎儀廠家談組織細胞的破碎方法很多,有機械方法、物理方法、化學方法和生物化學方法等。在破碎前,材料常需要預處理,如動物材料要除去與實驗無關甚至有妨礙的結締組織,脂肪組織和血污等,植物種子需要除殼,微生物材料需將菌體和發酵液成分分開等。
  不同實驗規模、不同實驗材料和實驗要求,使用的破碎方法和條件也不同。一些堅韌組織,如肌肉、植物的根莖等,常需要強烈的攪拌或研磨作用,才能把其組織細胞破壞。而比較柔軟的組織如肝、腦等,用普通的玻璃勻漿器即可達到完全破壞細胞的目的。對同一實驗材料,由于實驗目的(要求)的不同,采用的破碎方式也存在一定差異,如提取中的核酸和提取其中的核苷酸,前者必須保持十分溫和的條件,以保持分子的完整性;后者可采用強烈手段。
  高壓細胞破碎儀廠家講述組織細胞的常見破碎方法:
  1.機械法
  主要通過機械切力的作用使組織細胞破碎的方法,常用的器械有組織搗碎機、高壓細胞破碎儀、研缽和研磨、壓榨器等。
  1)組織搗碎機一般用于動物組織、植物肉質種子、柔嫩的葉芽等,轉速可高達10000rpm/M以上。由于旋轉刀片的機械切力很大,制備一些較大分子如核酸則很少使用。
  2)高壓細胞破碎儀的研缽磨球和玻璃管內壁之間間隙保持在十分之幾毫米距離,破碎細胞的程度比組織搗碎機高。制作勻漿器的材料,除玻璃外,還可以用硬質塑料、不銹鋼、人造熒光樹脂等。
  3)研缽多用于細菌或其他堅硬植物材料,研磨時常加入少量石英砂,玻璃粉或其他研磨劑,以提高研磨效果。
  4)細菌磨是一種改良了的研磨器,比研缽具有更大的研磨面積,而且低部有出口。操作時先把細菌和研磨粉調成糊狀,每次加入一小勺,研磨20-30秒即可將細菌細胞完全磨碎。
  2.物理法
  主要通過各種物理因素使組織細胞破碎的方法。在生化制備中常用的方法有:
  1)反復凍溶法先將樣品深冷至-15-20度使之凍固,再緩慢的融化,反復多次,多用于動物性材料。
  2)急熱驟冷法將材料投入沸水中,維持85-90分鐘,至水浴中急速冷卻,此法可用于細菌及病毒材料。
  3)超聲波處理頻率一般選在10KC至200KC,功率200-500瓦范圍,處理時間有數分鐘至數十分鐘不等,處理過程中注意冷卻。此法多用于微生物材料。
  3.化學及生物化學法
  有自溶法,酶解法和表面活性劑法等。
  1)自溶法在一定PH和適當的溫度下,利用組織細胞內自身的酶系統將細胞破碎的方法。此過程需較長時間,常用少量防腐劑如甲苯、氯仿等防止細胞的污染。
  2)酶溶法利用各種水解酶,如溶菌酶、纖維素酶、蝸牛酶、半纖維素酶、脂酶等,將細胞壁分解,使細胞內含物釋放出來。有些細菌對溶菌酶不敏感,加入少量巰基試劑或8摩爾尿素處理后,使之轉為對溶菌酶敏感而溶解。
  3)表面活性劑處理如十二烷基硫酸鈉、氯化十二烷基吡啶等。
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