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高壓勻漿機廠家淺述實驗室勻漿的制備步驟

發布時間:2017-11-06   點擊次數:926次
  高壓勻漿機廣泛應用于科研,醫療,化工制藥,食品工業等領域,物料在勻漿杯中通過電機旋轉驅動旋刀同時進行劈裂,碾碎,摻和等過程,是物料攪拌搗碎的過程。
  高壓勻漿機選用微型電機,電機驅動旋刀在瓶杯內作用,利用瓶內流體力學和高速機械剪切力做工。有大小六種瓶、刀、刀軸,并附有六個控溫杯,可根據物料的需要在杯內放入熱水或冷卻液進行調溫,并設有機械定位,整個機件作業自如方便,電器部分設有開關,通電指示燈、調速器可根據需要轉速進行無級調速,外殼設有接地裝置使用時安全可靠。
  高壓勻漿機廠家為您講解組織勻漿的制備步驟:
  1.取組織塊(0.2g~1g)zui少可到2~5mg,在冰冷的生理鹽水中漂洗,除去血液,濾紙拭干,稱重,放入5或10ml的小燒杯內。
  2.用移液管量取預冷的勻漿介質或者用0.86%冷生理鹽水,勻漿介質或生理鹽水的體積總量應該是組織塊重量的9倍,用移液管或移液器取總量的2/3的勻漿介質或生理鹽水于燒杯中,用小剪盡快剪碎組織塊。
  3.勻漿的方式有多種:手工勻漿、機器勻漿、超聲勻漿、反復凍融。
  手工勻漿:將剪碎的組織倒入玻璃勻漿管中,再將剩余的1/3勻漿介質或生理鹽水沖洗殘留在燒杯中的碎組織塊,一起倒入勻漿管中進行勻漿,左手持勻漿管將下端插入盛有冰水混合物的器皿中,右手將搗桿垂直插入套管中,上下轉動研磨數十次(6~8分鐘),充分研碎,使組織勻漿化。
  機器勻漿:用組織研磨機6m/s研磨制成10%組織勻漿,也可用高壓勻漿機制備勻漿時間20秒/次,間隙10秒,連續3-5次。
  超聲粉碎:用超聲波細胞破碎儀進行破碎,可用以振幅12.7mm超聲處理30秒使細胞破碎。
  反復凍融:培養或者分離的細胞可以用以上的方法勻漿,也可以反復凍溶3次左右,但有部分酶活力會受影響。
  取少量組織勻漿做涂片(直接涂片、染色均可),顯微鏡下觀察細胞是否磨破,若沒有破則可以延長勻漿時間或增加凍融次數。
  4.將制備好的10%勻漿用普通離心機或低溫低速離心機3000r/min左右離心10~15分鐘,若檢測ATP酶,則只需要1000轉/分,離心5分鐘,將離心好的勻漿留下上清棄下面沉淀。
  根據實驗需要,取適量上清液進行各種測定。
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